Вопрос / ответ

Как сделать так, чтобы криотопы не всплывали в жидком азоте?

Необходимо погрузить колпачок от криотопа в азот заранее. Затем надеть колпачок под уровнем азота, чтобы внутрь колпачка попало как можно меньше воздуха.

При разморозке эмбрион всплывает? Так и должно быть? Если он достигает поверхности раствора, то потом трудно его взять наконечником для стриппера. Очень неудобно.

Действительно, при оттаивании и откреплении от криотопа часто эмбрион медленно всплывает. Необходимо взять его наконечником для стриппера и переместить на дно, но осторожно и не более 1-3 раз за минуту нахождения в TS. Если эмбрион достиг поверхности, то можно набрать в наконечник TS и капнуть на него сверху, - вместе с раствором эмбрион сместится вниз. При переносе в DS также рекомендуется сверху на эмбрион вылить немного TS из наконечника, что предотвратит его всплытие, и, при смешивании растворов, разница в концентрациях будет смягчена.

Можно ли размораживать в меньшем объеме TS?

Объем TS4,0 мл создает необходимые условия для быстрого оттаивания клеток, находящихся на криотопе. Такой объем жидкости более инертен и дольше сохраняет температуру, близкую к 37⁰С, что является наиболее важным фактором при ревитрификации. А также создается необходимая глубина в чашке Петри диаметром 30-35 мм, что позволяет погрузить в раствор почти весь кончик криотопа.

Можно ли замораживать в каплях?

По протоколу эквлибрация происходит в течение 15 минут. При комнатной температуре происходит неизбежный рост осмолярности за счет испарения воды, что негативно сказывается на клетках. Поэтому производитель не рекомендует уменьшать объем сред, предусмотренный протоколом.

На сколько пациентов хватает одного набора заморозки?

Один набор для витрификации включает 1,5 мл эквилибрационного и 3,0 мл витрификационного растворов. На одну лунку необходимо 300 мкл. Поэтому сред рассчитано на 5 лунок. Рекомендуется замораживать не более 4 криотопов из одной лунки. Таким образом, можно заморозить до 8 бластоцист или до 16 ооцитов одной пациентки. Не следует замораживать эмбрионы разных пациентов в одной лунке друг за другом. Следовательно, с помощью набора можно заморозить эмбрионы или ооциты не более 5 пациенток.

Следует ли коллапсироватьбластоцисты перед заморозкой? Говорят, это улучшает выживаемость.

Выживаемость неколлапсированныхбластоцист при разморозке на средах Kitazato составляет 98-100%. Наоборот, дополнительная манипуляция по искусственному сжатию бластоцисты может вызвать её повреждение и, как следствие, приводить к снижению потенциала реэкспансии после разморозки.

Когда я переношу эмбрион из культуральной среды в раствор ES, я часто теряю его из вида. Может я делаю что-то не так?

В первую очередь проверьте настройки стереомикроскопа. Фокусировка не должна меняться при различном увеличении. Это достигается настройкой резкости на окулярах. Второе, плотность раствора ESвыше, чем у культуральной среды, поэтому эмбрион вместе со средой выталкивается наверх из ES. Следует переносить эмбрион в как можно меньшем количестве среды. То же самое происходит и при переносе эмбриона из ESв VS, где плотность еще выше. Можно предварительно набрать в наконечник стриппера растворVS, а затем взять эмбрион из ES.

Подписка на новостную рассылку

Подпишитесь на нашу рассылку, чтобы получать последние новости и информацию от нашей команды.